La unidad de citometría de flujo de la RAI ofrece a la comunidad científica una amplia gama de servicios basados en la citometría de flujo multiparamétrica tanto para análisis como para separación celular. Esta unidad ofrece el empleo de los citómetros disponibles por usuarios registrados (autoservicio) y la adquisición de muestras por el equipo técnico de la unidad.

La citometría de flujo multiparamétrica es una técnica por medio de la cual es posible analizar características estructurales y funcionales de células o partículas en suspensión que atraviesan una fuente de luz (láser). Esta metodología tiene múltiples aplicaciones, tanto en el área clínica, como en los campos de la investigación biomédica y de biología celular.

Esta herramienta de análisis permite cuantificar simultáneamente diversos parámetros (morfológicos, fenotípicos, bioquímicos) de células a nivel individual y de manera expedita (miles de células/segundo), lo cual la convierte en una metodología de gran validez y aplicabilidad.

Las células presentes en la suspensión celular habitualmente son teñidas con anticuerpos conjugados a diversos fluoróforos (por ejemplo FITC, PE Cy5, APC, entre otros) ya sea para marcar moléculas de superficie o intracitoplásmicas que permitan realizar inmunofenotipificación o análisis de diversos procesos celulares.

Principales Aplicaciones

• Detección de subpoblaciones celulares (inmunofenotipo)
• Análisis de ciclo celular y ensayos de proliferación celular
• Apoptosis y viabilidad
• Señalización intracelular
• Metabolismo oxidativo
• Detección de fosfoproteínas a nivel unicelular
• Ensayos multiplexados (Beads arrays)
• Aislamiento de diversas subpoblaciones celulares (cell sorting)

Fundamentos

Un citómetro de flujo se basa en tres principales sistemas

1. Sistema óptico

Este sistema está constituido por los siguientes elementos: a) láser, b) filtros y c) lentes.

La fuente de luz es producida por uno o varios láser. La mayoría cuenta con un láser de gas argón refrigerado por aire o láser en estado sólido, los cuales producen una luz monocromática de 488 nm como láser principal. Esta luz se emplea para la excitación de la mayoría de los fluorocromos y provoca la dispersión de luz que es una medida indirecta de las características de la suspensión celular o de las partículas evaluadas. La luz dispersada y la fluorescencia emitida es recogida por un sistema de filtros y lentes que dirigen las señales a los sensores de detección (fotodiodo/fotomultiplicadores).

2. Sistema hidráulico

Está conformado por un conjunto de controladores neumáticos y fluídicos necesarios para poder lograr un flujo laminar que permita a la suspensión celular atravesar la cámara de flujo de forma estable e individualizada.

3. Sistema electrónico

Los fotomultiplicadores convierten la luz dispersa (fotones) en señales eléctricas (voltaje). Estas señales analógicas son amplificadas y convertidas para su digitalización y posterior visualización en el computadora.

La integración de estos sistemas permite un análisis rápido y preciso de una gran cantidad de células en poco tiempo.

Equipos

Características principales de los equipos disponibles:

Equipo	Análisis multiparamétrico (MP)	Selección celular (sorting)	Máx. células / seg	Láser (excitación en nm)
Accuri C6	Sí	No		488/640
LSR II	Sí	No	25,000	488/640/405/355
Aria III	Sí	Sí	25,000	488/635/405

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Manual de procedimientos del Accuri C6 Manual del usuario Guía rápida de uso

BD Accuri C6

Configuración BD Accuri C6
No. Parámetros: 6
No. Colores: 4
2 Láseres 4 colores
3-Blue / 1-Red (3-1)
Fecha de configuración: enero-2015
Configuración estándar

Láser	Canal	Filtro	Fluorocromo
Blue (480 nm)	FL - 1	530/30	FITC / BB515 / AF488 / CFSE / GFP
	FL - 2	585/40	PE / PI / PE-CF594
	FL - 3	670 LP	PerCP / PE-Cy5 / PerCP-Cy5.5 / PE-Cy7 / 7-AAD
Red (640 nm)	FL - 4	675/25	APC / AF647

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Manual de procedimientos del Fortessa LSRII Manual del usuario Guía rápida de uso

BD LSRII Fortessa

Configuración BD LSRII Fortessa 4 lásers 16 colores (2-6-5-3)

		BP	DM LP	Detector
UV 355 nm	A	530/30LP	505LP	BUV496
	B	450/50		AF350/DAPI/Indo-1
	C
Violet 405 nm	A	780/60	750LP	BV786
	B	710/50	690LP	BV711
	C	660/20	630LP	BV650
	D	610/20	595LP	BV605
	E	525/50	475LP	BV510/V500
	F	450/50		BV421/V450
	G
Blue 488	A	780/60	750LP	PECy7
	B	695/40	685LP	PE-Cy5/PerCP/PerCPCy5.5
	C	610/20	600LP	PECF594
	D	575/26	550LP	PE/PI
	E	530/30	505LP	AF488/BB515/CFSE/FITC/GFP
	F	488/10		SSC
Red 640 nm	A	780/60	750LP	APCH7/APCCy7
	B	730/45	710LP	AF700
	C	670/14		APC/AF647

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Manual de procedimientos del Aria III Sorter Manual de usuario

Aria III Sorter

Configuración Aria III Sorter
No. Parámetros: 11
No. Colores: 9
3 Láseres 9 colores FSC 1.5, 70 um, 488 - 633 - 405
Fecha de la configuración: 07-Julio-2016
Sheat Pressure: 70 psi
Nozzle size: 70 um
Windows Extension: 2.00 us

Láser	Detector	Filter	Mirror LP	Fluorocromo
Blue (488 nm)	A	780/60	735	PE-Cy7
	B	695/40	655	PE-Cy5 / PerCP / PerCP-Cy5.5
	C	616/23	610	PE-CF594
	D	585/42	556	PE / PI
	E	530/30	502	AF488 / BB515 / FITC / GFP / CFSE
	F	488/10	-	SSC
	G	-	-	-
	H	-	-	-
Red (633 nm)	A	780/60	755	APC-Cy7 / APC-H7
	B	660/20	-	APC
	C	-	-	-
Violet	A	510/50	502	BV510 / V500
	B	450/40	-	BV421 / V450
	C	-	-	-
	D	-	-	-
	E	-	-	-
	F	-	-	-
	G	-	-	-
	H	-	-	-

Para el servicio de separación de células contamos con Nozzle de 70, 85 y 100 μ

Contacto

Para mayor información o asesoría sobre los servicios favor de contactar a:

Dra. Diana Gómez Martín Investigadora Responsable
• d_gomarhotmail.com

Dr. Guillermo Juárez Vega Técnico Académico
• guillermovegacic.unam.mx


• +01 (55) 5487 0900 Ext. 6330 ó 6331