El Laboratorio de Biología Molecular de la RAI pone a la disposición de los investigadores un secuenciador de DNA de 24 capilares (3500xL Genetic Analizer, Applied Biosystems) y tres termocicladores para PCR en tiempo real (dos StepOnePlus Real-Time PCR System y un QuantStudio 12K Flex Real-Time PCR System, Applied Biosystems), para la implementación y el desarrollo de diversas técnicas basadas en electroforesis capilar y PCR en tiempo real que favorezcan el avance y desarrollo de sus investigaciones.
Así, el Laboratorio de Biología Molecular pretende contribuir al desarrollo de los proyectos científicos que involucren la secuenciación Sanger de DNA, el análisis de fragmentos en electroforesis capilar, los estudios de microsatélites, el estudio y análisis de la expresión genética, la genotipificación y la presencia/ausencia de patógenos entre muchas otras.
Fundamentos
PCR en tiempo real
La PCR en tiempo real es una variante de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizada para amplificar y simultáneamente cuantificar de forma absoluta el producto de la amplificación de ácido desoxirribonucleico (DNA). Para ello emplea un molde de DNA, al menos un par de cebadores específicos, dNTPs, un tampón de reacción adecuado, y una DNA polimerasa termoestable; a dicha mezcla se le adiciona una sustancia marcada con un fluoróforo que, en un termociclador que albergue sensores para medir fluorescencia tras excitar el fluoróforo a la longitud de onda apropiada, permita medir la tasa de generación de uno o más productos específicos. Dicha medición, se realiza luego de cada ciclo de amplificación y es por esto que también se le denomina PCR en tiempo real.
SECUENCIACIÓN DE DNA
La secuenciación en capilares (3500xL Genetic Analyzer) se basa en la reacción de Sanger y es un método conocido como “secuenciación por terminador fluorescente”. La principal ventaja de este método es que la secuenciación se puede llevar a cabo en una sola reacción, en lugar de cuatro. En una secuenciación por terminador fluorescente se marcan cada uno de los cuatro didesoxinucleótidos que terminan la cadena con un colorante fluorescente diferente, siendo detectadas por un láser que las excita a distintas longitudes de onda, lográndose así el análisis de múltiples fragmentos al mismo tiempo, que se van a mover hacia el polo positivo y se separarán de acuerdo a la longitud del campo eléctrico: los de menos peso molecular viajarán más rápido a través del capilar, los de mayor peso molecular lo harán más lentamente.
Equipos
| Manual de procedimientos para el uso del StepOnePlus
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StepOnePlus Real-Time PCR System |
| Manual de procedimientos para el uso del QuantStudio 12K Flex
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QuantStudio 12K Flex Real-Time PCR System |
| Manual de procedimientos para el servicio de secuenciación
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3500xL Genetic Analyzer |
Contacto
Por motivo de la pandemia sólo se atenderá contactando vía correo electrónico con el investigador responsable o la técnica académica. Para mayor información o asesoría sobre los servicios, favor de escribir a:
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Dr. Alfredo Ulloa Aguirre
Investigador Responsable
- ulloaaunam.mx
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Dr. Rubén Gutiérrez Sagal
Investigador
- rgutierrezsagalcic.unam.mx
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M. en C. Teresa Zariñán García
Técnico Académico
- tzarinancic.unam.mx
- +01 (55) 5487 0900 Ext. 6335 ó 6336