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Servicios
- PCR tiempo real StepOnePlus
- PCR tiempo real QuantStudio
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Descripción
- PCR en tiempo real
La PCR en tiempo real es una variante de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) utilizada para amplificar y simultáneamente cuantificar de forma absoluta el producto de la amplificación de ácido desoxirribonucleico (DNA). Para ello emplea un molde de DNA, al menos un par de cebadores específicos, dNTPs, un tampón de reacción adecuado, y una DNA polimerasa termoestable; a dicha mezcla se le adiciona una sustancia marcada con un fluoróforo que, en un termociclador que albergue sensores para medir fluorescencia tras excitar el fluoróforo a la longitud de onda apropiada, permita medir la tasa de generación de uno o más productos específicos. Dicha medición, se realiza luego de cada ciclo de amplificación y es por esto que también se le denomina PCR en tiempo real.
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Requisitos de las muestras
Favor de leer el Reglamento para uso de los equipos.
- PCR tiempo real StepOnePlus
El laboratorio de biología molecular pone a la disposición de los investigadores dos termocicladores de tiempo Real StepOnePlus, para el desarrollo e implementación de técnicas basadas en el PCR de tiempo real. Esta tecnología tiene un sin fin de aplicaciones importantes en los laboratorios de investigación, entre las que podemos mencionar:
- Expresión génica
- Cuantificación absoluta/cuantificación relativa
- Genotipificación
- Presencia/ausencia de patógenos
- Curva estándar
- CT comparativo (∆∆CT)
Para el uso de estos equipos, los investigadores deberán previamente adquirir sus ensayos con los proveedores de su preferencia o bien diseñar ellos mismos sus propios ensayos. Recomendamos que preparen sus placas de reacción en sus propios laboratorios para evitar al máximo los problemas de contaminación cruzada. Sin embargo, si por alguna razón en particular, es necesario que algunos pasos finales sean realizados en la RAI, se contará con un espacio destinado exclusivamente para estos fines.
Es importante que los usuarios reserven con anticipación el día y la hora para el uso de cualquiera de los dos equipos con que contamos.
Es importante subrayar que este instrumento solamente puede utilizar placas rápidas (fast) de 96 pozos de 0.1 ml (MicroAmp Fast Optical 96-Well Reaction Plate, 0.1 mL).
Las placas de reacción se deben transportar, de preferencia, cubiertas con papel aluminio para evitar la excitación de los fluoróforos.
Para un servicio ágil y expedito, se recomienda que el usuario proporcione, junto con las muestras, una plantilla en EXCEL indicando la disposición de las muestras en la placa.
- PCR tiempo real QuantStudio
La RAI, a través de su laboratorio de biología molecular, pone a la disposición de los investigadores el PCR de tiempo Real QuantStudio 12K Flex, siendo la característica más sobresaliente de este equipo su capacidad para procesar un gran número de muestras a través de lo que se conoce como placas de arreglo abierto (TaqMan® OpenArray® Real-Time PCR Plates). Esta tecnología está teniendo grandes repercusiones en el avance y desarrollo de la genotipificación humana.
Es conveniente señalar que los usuarios deben adquirir sus arreglos abiertos con el proveedor Life Technologies, ya sea de los que tiene de línea o de los que crea específicamente para cubrir las necesidades de cada investigador (Custom).
Los usuarios que requieran el procesamiento de sus arreglos abiertos deberán cumplir con los siguientes requisitos:
El DNA que se utilizara en las placas de arreglo abierto debe tener las siguientes características:
- La razón 260/280 nm del DNA deber ser mayor o igual a 1.8 y menor o igual a 2.
- La integridad del DNA debe haber sido comprobada por lo menos en electroforesis en gel de agarosa.
- El DNA debe resuspenderse en H2O mQ estéril, grado biología molecular.
- El DNA debe haber sido resuspendido a una misma concentración.
El usuario debe traer todos los accesorios que acompañan a las placas de arreglo abierto:
- Tapas, tapones (plugs), jeringas con fluido de inmersión, soporte transportador (carrier) y caja de puntas para el sistema Accufill.
El usuario debe traer el DNA y el Master Mix (TaqMan Open Array Real-Time PCR Master Mix) dispensados en una placa de 384 pozos (OpenArray 384-well Sample Plates).
Es necesario que el usuario proporcione un archivo en Excel donde este anotada la disposición de las muestras en la placa de 384 pozos.
INFORMACIÓN Y REQUISITOS PARA LA OBTENCIÓN DE LOS SERVICIOS:
El usuario deberá entregar la solicitud de servicio debidamente requisitada y firmada por el investigador responsable, manifestando de esta manera su compromiso de pagar los gastos que generen el procesamiento de sus muestras (Formato 1).
Horarios de atención y servicio: por la pandemia sólo se atenderá contactando a la M. en C. Teresa Zariñan o el Dr. Rubén Gutiérrez vía correo electrónico.
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Tarifas
SERVICIO CONSORCIO1 INSTITUTOS NACIONALES DE SALUD2 OTRAS DEPENDENCIAS PÚBLICAS INSTITUCIONES PRIVADAS StepOne Plus PCR en tiempo real (corrida) $150.00 $170.00 $190.00 $210.00 Quant Studio 12KFlex (hora) $250.00 $280.00 $300.00 $350.00 Todos los precios incluyen IVA.
1. Usuarios del consorcio de la RAI (INCMNSZ, INCAN, INCICH, INMEGEN, UNAM).
2. Usuarios afiliados a los Institutos y Hospitales de Alta Especialidad de la CCINSHAE.